體視熒光顯微鏡的常規(guī)使用方法

更新時(shí)間：2026-06-08

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體視熒光顯微鏡是結(jié)合‌體視顯微技術(shù)與熒光成像‌的光學(xué)儀器，兼具體視顯微鏡的三維立體觀察能力和熒光顯微鏡的特異性標(biāo)記成像能力，在科研和工業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。

核心組件分為三部分：

‌熒光濾色片組‌：由激發(fā)濾光片、分光鏡和發(fā)射濾光片組成，用于篩選特定波長(zhǎng)的激發(fā)光與發(fā)射光，減少雜光干擾。

‌光學(xué)成像組件‌：包含物鏡、變倍器和目鏡，總放大倍數(shù)可達(dá)到1000倍以上。

‌成像系統(tǒng)‌：多采用CCD/CMOS相機(jī)采集圖像，現(xiàn)代機(jī)型通常配套專業(yè)分析軟件，支持三維重建、熒光強(qiáng)度測(cè)量、圖像拼接等功能。

開機(jī)與設(shè)備準(zhǔn)備：

取下防塵罩，按下調(diào)焦立柱上的電源開關(guān)，若只需明場(chǎng)觀察無(wú)需開啟熒光光源，若需熒光觀察需額外開啟熒光光源激發(fā)器開關(guān)。

開啟熒光光源后需要等待‌5~15分鐘預(yù)熱‌，待光源發(fā)光強(qiáng)度穩(wěn)定后再開始觀察，點(diǎn)燃紫外燈后15分鐘內(nèi)不得關(guān)閉，關(guān)閉后3分鐘內(nèi)不得再啟動(dòng)。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求切換到對(duì)應(yīng)熒光濾色片組，比如觀測(cè)GFP綠色熒光蛋白需將轉(zhuǎn)盤撥到對(duì)應(yīng)GFP通道，調(diào)整對(duì)應(yīng)的激發(fā)/發(fā)射濾光參數(shù)。

樣本放置與對(duì)焦：

將預(yù)處理好的樣本放在載物臺(tái)中心，調(diào)整至物鏡正下方；如果樣本需要固定，可借助橡皮泥壓平保證觀察面平整。

優(yōu)先使用‌低倍物鏡‌找到樣本目標(biāo)區(qū)域，再切換到高倍物鏡，先粗調(diào)焦再微調(diào)焦，直到圖像清晰；如果使用油鏡觀察，需要在玻片上加無(wú)熒光油，低倍鏡觀察無(wú)需添加。

調(diào)節(jié)雙目目鏡瞳距，調(diào)整屈光度環(huán)，保證雙眼都能觀察到清晰物像，避免視疲勞。

根據(jù)觀察需求調(diào)節(jié)光源強(qiáng)度，適配落射光/透射光切換，保證熒光亮度適中。

熒光觀察與注意事項(xiàng)：

先在普通光源下定位目標(biāo)，再切換到熒光模式觀察，避免樣本長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外光下導(dǎo)致熒光猝滅——FITC標(biāo)記物在紫外下照射30秒，熒光亮度就會(huì)降低50%。

單次觀察時(shí)間建議控制在‌1~2小時(shí)以內(nèi)‌，超過(guò)90分鐘汞燈發(fā)光強(qiáng)度會(huì)下降，熒光也會(huì)明顯減弱，最長(zhǎng)不要超過(guò)3小時(shí)。

觀察過(guò)程中如果長(zhǎng)時(shí)間不觀測(cè)，可臨時(shí)關(guān)閉熒光快門，延長(zhǎng)光源壽命、保護(hù)樣本熒光。

如果需要記錄結(jié)果，需要及時(shí)完成攝影采集，建議使用ASA200以上的高速感光膠片或高靈敏度相機(jī)，避免熒光猝滅后無(wú)法成像。

關(guān)機(jī)與整理：

圖像采集完成后，先關(guān)閉圖像采集軟件，再關(guān)閉設(shè)備電源，遵循「先關(guān)軟件、后關(guān)電源」的順序，避免影響儀器參數(shù)設(shè)置。

將放大倍數(shù)調(diào)至最低，降低物鏡高度，取下樣本清理載物臺(tái)，給儀器罩上防塵罩，完成使用登記。

如果是更換了新的汞燈燈泡，需要從開始使用就記錄使用時(shí)間，方便預(yù)估使用壽命及時(shí)更換。

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